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      熒光定量PCR實驗時的好方法

      更新時間:2020-07-18      點擊次數:1823

      實時熒光定量PCR技術實現了PCR從定性到定量的飛躍,具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,成為核酸分子定量的標準方法。在做熒光定量PCR實驗時建議使用這些耗材:96孔光學反應板配合光學膜,0.2ml光學八聯反應管配合光學膜,0.2ml光學八聯反應管配合平蓋的光學八聯管蓋等。在做熒光定量PCR實驗時有一些好的方法分享給大家,例如在使用單管或者8連管做實驗時,如果在樣本數量不多的時候,建議在樣品加熱塊(TRAY)上對稱的安放樣品,并且先放在第6列或者第7列,然后逐漸向兩邊放置。這樣熱蓋壓下來的時候不至于發生傾斜,每個反應管的受力和受熱都比較均勻,提高了孔與孔之間的數據精密性。又例如使用96孔板做實驗的時候,建議使用光學膜代替蓋子來密封反應孔。封膜的方法要先沿著96孔板的縱向壓膜,然后在橫向,后在沿著板的邊緣按壓密封。Pilot5-8T凍干機應用示例(熒光PCR凍干):

      1. 探針、底物、引物原料要求確定。
      2. 凍干溶液配方開發,采用正交法或響應曲面法進行輔料篩選。
      3. 選擇適合的包材和模具。
      4. 設計凍干曲線配合輔料篩選。
      5. 確定配方及工藝。
      6. 穩定性測試。
      7. 根據穩定性測試結果修正工藝或配方。
      8. 整個環節注意環境、設備、人員的結合。

       

      型號

      Pilot3-6T

      Pilot5-8T

      Pilot7-12T

      Pilot10-15T

      凍干面積

      0.42

      0.56

      0.84

      1.05

      22西林瓶裝量(20ML

      ≥900

      ≥1170

      ≥1500

      ≥2100

      16西林瓶裝量(5ML

      ≥1700

      ≥2210

      ≥3100

      ≥4100

      冷阱溫度(空載)

      -85

      真空度(空載)

      ≤1Pa

      板層溫度(空載)

      -55

      板層制冷方式

      硅油循環

      板層數量

      3+1

      4+1

      4+1

      5+1

      板層尺寸(mm

      350*400

      350*400

      350*600

      350*600

      捕水能力

      6L

      8L

      12L

      10L

      凍干效率

      3L/24H

      5L/24H

      7L/24H

      10L/24H

      板層間距

      100mm

      80mm

      90mm

      100mm

      穿墻隔離

      凍干曲線擬合度

      100%

      100%

      100%

      100%

      晶型控制

      蒸汽分壓控制

      升華結束判定

      凍干終點測試

      壓塞

      液壓

      整機尺寸 (約)

      W860*D1400*H1800

      W860*D1400*H1800

      W860*D1700*H1900

      W860*D1700*H1900

       

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